Peter Quill (interpretado por Chris Pratt) é um terrestre que foi raptado para o espaço exterior desde criança e, sob a tutela do seu pai adotivo Yondu (Michael Rooker), tornou-se um delinquente intergaláctico que se intitula "Senhor das Estrelas". Durante uma missão, ele rouba uma esfera misteriosa, tornando-se assim o alvo de sequestro dos caçadores de recompensas Rocket Raccoon (voz de Bradley Cooper) e Groot (voz de Vin Diesel), enquanto a enigmática Gamora (Zoe Saldana) também está determinada a obter a esfera. Após uma série de peripécias hilariantes e atribuladas, o Senhor das Estrelas é forçado a formar uma equipa com estes três e com o vingativo Drax, o Destruidor (Dave Batista), para fugir da perseguição do Acusador Ronan (Lee Pace). No entanto, esta esfera misteriosa detém um poder infinito, e a equipa terá de unir forças para enfrentar Ronan, a fim de potencialmente salvar toda a galáxia - e assim nascem os Guardiões da Galáxia.